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cccDNA检测

编辑:admin 时间:2016-05-09 18:38 点击: 来源:www.gd0451.com

  病毒cccDNA检测——准确了解当前治疗效果
    药物不能清除病毒的根本原因是病毒复制模板的存在,药物只对病毒有作用,但对病毒复制模板毫无办法,所以导致病毒不断复制。通过cccDNA检测,大家可以清楚地知道复制模板的数量和清除情况。病毒复制模板的数量能够说明病毒复制是否活跃,而了解清除情况对患者下一步的治疗有着决定性与引导性的意义。该检测适合病毒携带者、初步确诊的肝病患者以及正在治疗的肝病患者。万博体育manbetx3.0PCR基因诊断实验室对cccDNA进行定量定性检测,以了解肝内病毒清除状况,从而使患者了解治疗进展,制定有针对性的治疗方案。
  由于PCR技术灵敏度极高,rcDNA和cccDNA的序列又具有高度的同源性,因此在用PCR技术检测cccDNA时,必须确保只能扩增cccDNA而rcDNA不被扩增。目前利用rcDNA和cccDNA结构上的差异可以解决这一问题。由于rcDNA的正链和负链上均存在缺口,故可以设计跨越两个缺口的引物,使rcDNA不会被扩增,而cccDNA由于是完整的双链结构则可以被选择性扩增。在PCR检测cccDNA时,起始模板量不能过高,否则rcDNA也有可能被扩增,研究发现每个PCR反应管中HBV-DNA的量在1pg(约6×105拷贝)时能达到最佳的灵敏度与选择性,因此在分析前应估计标本中HBVDNA的量。虽然套式PCR更为灵敏,但由于需取PCR产物进行再次扩增,因此在操作中要注意防止PCR产物污染,避免假阳性。
  在定性检测的基础上,可以进一步对cccDNA进行定量检测。仍以PCR定量分析技术中,尤其是竞争PCR技术的敏感性和精确度高。实时荧光定量PCR检测cccDNA的方法通过PCR仪对产生的荧光信号进行实时监测,从而对cccDNA进行定量。每扩增一个cccDNA分子,就会产生一个荧光信号,根据信号的强弱来定量。
  病毒cccDNA检测是评价抗病毒药物的新指标,是评价抗病毒是否能感染肝外组织的客观指标之一,是评价患者当前病情及治疗效果的指标。可见患者提高对cccDNA检测的认识是十分必要的,cccDNA检测对的治疗起着至关重要的作用。万博体育manbetx3.0采用目前治疗的热门疗法——联合抗病毒疗法,使诸多患者达到临床治愈,重新拥有快乐和谐的生活。

 

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